Una domanda?
Bisogno di aiuto?

27 Maggio 2021

Produzione e purificazione di vettore lentivirale in scala di laboratorio per ingegneria genetica potenziata ex-vivo e in-vivo.

I vettori lentivirali (VL) trovano sempre più applicazione nella terapia genica e cellulare. La produzione standard in laboratorio di VL non è facilmente modulabile; inoltre, i VL per la ricerca spesso contengono dei contaminanti che possono interferire con le fasi successive. Inoltre, le pipeline per la produzione e la purificazione di VL, sono state sviluppate principalmente per essere utilizzate in studi clinici costosi, effettuati su larga scala. Pertanto è ancora necessario un procedimento standardizzato ed economicamente efficiente, in grado di ottenere studi sperimentali e preclinici delle terapie geniche in-vivo ed ex-vivo, in quanto l’elevata infettività e reazioni avverse limitate sono fattori importanti che hanno effetti sui risultati sperimentali anche negli studi preclinici. In questo studio si descrive un procedimento ottimizzato in scala di laboratorio in cui un surnatante contenente VL viene purificato e concentrato in fasi sequenziali cromatografiche ottenendo VL biologicamente attivi con un titolo infettivo e un’attività specifica nell’ordine di rispettivamente 109 unità trasducente (TU)/mL e 5×104 TU/ng di HIV Gag p24. Il processo di purificazione rimuove >99% del plasmide iniziale, del DNA e delle impurità delle proteine, garantendo un trasferimento genico più elevato e una efficacia di editing delle cellule staminali ematopoietiche e progenitrici (HSPC) ex vivo che si rigenerano nell’immunodeficienza combinata grave (SCID) e riducendo altresì la riduzione  dell’attivazione di risposte infiammatorie ex vivo e in vivo rispetto ai vettori degli studi di laboratorio abbinati a TU. I risultati evidenziano il valore che ha la produzione di VL purificati accessibili per gli studi sperimentali e per i test preclinici.

Lo Zetasizer ULTRA è stato utilizzato con successo per la misura della concentrazione virale (particles/mL) e misura dello stato di aggregazione dei virus.

Fonte

Laboratory-Scale Lentiviral Vector Production and Purification for Enhanced Ex Vivo and In Vivo Genetic Engineering- Monica Soldi, Lucia Sergi, Giulia Unali, Luigi Naldini, Mario Leonardo Squadrito 

Scarica la pubblicazione completa