Esosomi & EVs

Nanoview ha sviluppato una tecnologia che consente la determinazione dei lentivirus a tutti gli stadi del processo di purificazione e che collega l’informazione proteomica con quella fisica/dimensionale.

Sono state analizzate le EVs derivate dal plasma di pazienti affetti da SLA (n = 106), dai soggetti controlli (n = 96),dai modelli murini SOD1G93A e TDP-43Q331K di SLA. Le EVs del plasma sono state purificate mediante isolamento a base di nichel. La morfologia e distribuzione dimensionale delle vescicole extracellulari sono state caratterizzate attraverso le tecniche di Nanoparticle Tracking analysis (NTA) (attraverso  l’uso dello strumento Nanosight NS300 della Malvern Panalyitical).

Attraverso la tecnica AF4 è possibile predire il comportamento di una nanomedicina, sia in presenza della molecolatarget che in presenza di potenziali fenomeni avversi (contatto con proteine del plasma), con un costo e dei tempi decisamente ridotti rispetto ai test in vivo.

Nella presente nota applicativa viene presentato l’accoppiamento l’EAF4-MALS con NTA per l’analisi di liposomi ed esosomi in fluidi biologici complessi.

In questo studio, si dimostrerà che il succo di Citrus Clementina contiene nanovescicole impacchettate con un complesso biocargo.

Durante la purificazione del plasma sanguigno mediante ultracentrifugazione, la maggior parte delle particelle rilevabili misurate all’interno di un campione sono risultate essere lipoproteine ​​anziché EV. Questi contaminanti rendono difficile mettere in relazione i cambiamenti sperimentali o clinici con i dati misurati. ExoView supera queste sfide misurando solo EV specifici che presentano antigeni di superficie target. Lo fa senza la necessità di purificazione del campione.

Una nuovissima tecnica basata su chip di interazione permette inoltre di isolare solo gli esosomi presenti nei fluidi (anche in quelli biologici come Plasma, Siero, Urine…) e caratterizzarne con precisione l’eventuale presenza di proteine di superficie (di conseguenza è possibile definirne l’origine, anche i batteri producono delle vescicole extracellulari simili agli esosomi) e addirittura il loro cargo.

Lo studio esplora il potenziale uso di esosomi plasmatici (nanovescicole rilevabili direttamente nel plasma) che esprimono PSA (Exo-PSA) nel distinguere individui sani, BPH e PCa. Gli esosomi sono stati ottenuti da campioni di plasma di 80 PCa, 80 BPH e 80 donatori sani (CTR). La NanoParticle Tracking Analysis (NTA) (NanoSight NS300, Malvern Panalytical) è stata utilizzata per misurare la distribuzione dimensionale e la concentrazione di campioni di vescicole extracellulari in sospensione liquida.

La microscopia a super-risoluzione sorpassa la barriera risolutiva dei microscopi ottici convenzionali e permette l’individuazione e la quantificazione di singole proteine e acidi nucleici a livello sub-vescicolare.