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In breve

La piattafforma Uncle combina misure DSF, light scattering statico (SLS) e light scattering dinamico (DLS) per fornire risultati in merito a proprietà strutturali (folding-unfolding) e aggregazione delle proteine, il tutto sullo stesso campione. Il sistema consente inoltre l’analisi personalizzabile attraverso il rilevamento della fluorescenza a spettro completo consentendo così di ottenere un pannello completo di informazioni relative alla stabilità di proteine e biomolecole.

Descrizione tecnica

Uncle combina 3 diverse modalità di misurazione: fluorescenza, Light Scattering statico (SLS) e Light Scattering dinamico (DLS). In questo modo è possibile ottenere tutti i dati in poche ore e utilizzare una quantità minima di campionate per la scelta della migliore formulazione, biomolecola o vettore virale. La piattaforma Uncle consente di ottenere i seguenti parametri:

  • Tm e Tagg
  • Stabilità isotermica
  • Stabilità del capside virale
  • Tm con SYPRO (DSF)
  • Dimensionamento e polidispersità
  • Dimensionamento con rampa termica
  • Recupero termico
  • Viscosità
  • kD
  • B22
  • G22
  • ΔG

È possibile caratterizzare la stabilità delle proteine su un massimo di 48 campioni in meno di 2 ore. Acquisire Tm e Tagg contemporaneamente per sapere quando il processo di unfolding e denaturazione porta all’aggregazione. Aggiungendo una lettura DLS prima della rampa di temperatura consente inoltre di conoscere lo stato di partenza del sistema oggetto di studio!

Uncle è dotato di una serie di applicazioni personalizzate che si concentrano sulle proteine, sui coloranti reporter o sui vettori, e sul loro comportamento in termini di stabilità isotermica nel tempo. Grazie alle sue applicazioni isotermiche, Uncle può essere utilizzato per tutti quei disegni sperimentali volti a testare la stabilità a lungo termine.

Uncle si abbina a SYBR Gold per capire quando il DNA inizia a fuoriuscire, molto prima che il capside dell’AAV si rompa, quantificate il DNA libero iniziale e la quantità che si libera dopo una rampa termica per comprendere quando l’aggregazione sfugge di mano e misurare il titolo delle particelle con SLS e DLS. Inoltre, è possibile assicurarsi che il DNA o l’RNA non fuoriescano dai vettori nel corso del tempo. La fluorescenza a spettro completo e l’applicazione SYBR Gold isotermica di Uncle permettono di effettuare un test di conservazione isotermica accelerata e a basso volume.

Con Uncle è inoltre possibile ottenere l’intero spettro di fluorescenza, quindi non è necessario sapere in anticipo come si comporta il campione. Se volete sperimentare nuovi trucchi con i coloranti, Uncle è in grado di rilevare anche quelli. La misura SLS di Uncle cattura l’aggregazione con due lunghezze d’onda, il che lo rende super sensibile e adatto a scoprire aggregati di un’ampia gamma di dimensioni.

Uncle consente di ottenere B22 e kD contemporaneamente sullo stesso campione oppure, passare a G22 se si lavora a concentrazioni molto elevate. L’analisi di questi parametri consente di valutare rapidamente se la combinazione proteina-formulazione è buona o rischiosa per l’aggregazione con un software semplice ed intuitivo.

Il software Uncle offre ai laboratori funzioni conformi alla normativa 21 CFR Parte 11 come protezione con password, firme elettroniche, tracciabilità completa dei dati.

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