Le proteine, il DNA e l’RNA assorbono la luce nell’intervallo ultravioletto in soluzione, il che significa che è possibile applicare la spettroscopia UV/Vis per quantificare le loro concentrazioni (Figura 1). La quantificazione con la spettroscopia UV/Vis è chiamata spettrometria UV/Vis e utilizza la legge di Beer, talvolta chiamata legge di Lambert-Beer.
Figura 1. Spettri di proteine e DNA a diverse diluizioni.
Come funziona la spettroscopia UV/Vis?
La quantità di luce assorbita da un campione di proteine, DNA o RNA è direttamente proporzionale alla sua concentrazione. Le proteine assorbono maggiormente a 280 nm, mentre il DNA e l’RNA raggiungono il picco a 260 nm. Con la legge di Beer si determina la concentrazione del campione in base all’assorbanza a 280 nm o 260 nm (chiamata A280 o A260), alla lunghezza del percorso nota e al coefficiente di estinzione o fattore di concentrazione del campione. Gli spettrofotometri UV/Vis eseguono queste misure e questi calcoli automaticamente e senza reagenti aggiuntivi. I migliori spettrometri sono in grado di effettuare misure ad alta produttività e con bassi volumi di campione.
La spettroscopia UV/Vis è uno dei metodi più antichi e consolidati per quantificare direttamente proteine, DNA e RNA. Unchained Labs spinge la quantificazione UV/Vis a un livello superiore grazie a ottiche innovative, materiali di consumo ben controllati e tecniche di analisi perfezionate.
